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LES TESTS PCR EN TEMPS REEL

L'amplification en chaîne par polymérase (ACP) ou réaction en chaîne par polymérase est une méthode de biologie moléculaire d'amplification génique in vitro.

Elle permet de dupliquer en grand nombre (avec un facteur de multiplication de l'ordre du milliard) une séquence d'ADN ou d'ARN connue, à partir d'une faible quantité (de l'ordre de quelques picogrammes) d'acide nucléique (séquence spécifique d’ADN (l’Amplicon)) et d'amorces spécifiques constituées d'oligonucléotides de synthèse de 20 à 25 nucléotides.

Forts de notre expérience dans le domaine de la maladie de Lyme et dans ses co-infections, notre laboratoire s’enrichie maintenant d’une nouvelle de PCR dite "en temps réel".

Le test de PCR en temps réel que nous pratiquons est un test ADNucleis ®.

C’est un test d’amplification des acides nucléiques des Borrelia ainsi que de nombreuses co-infections associées avec un contrôle d’extraction et d’inhibition (EPC).

Ce contrôle permet de s’assurer qu’un résultat négatif ne peut être dû à une mauvaise extraction et/ou à la présence d’inhibiteurs de PCR en trop grande quantité.

Ces tests sont réalisés à partir de l’ADN extrait de l’échantillon.

Les kits contiennent un premix PCR avec une paire d’amorces spécifiques à la cible. Un deuxième premix permet le contrôle de l’extraction et de l’inhibition de la PCR (EPC). La fluorescence mesurée en temps-réel est soit due à la libération d’un fluorophore dû à la dégradation de la sonde pour la chimie Taqman ou à l’intercalement d'un agent fluorescent dans les amplicons synthétisés pour la chimie Sybr. Le niveau de fluorescence est relatif à l’accumulation des produits d’amplification spécifiques. Ce système d’amplification est validé sur : (1) un plasmide comportant un insert spécifique de la cible (contrôle positif : plasmide CP-Anaplasma spp; (2) un plasmide comportant un insert spécifique


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